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R25001Zeocin 博莱霉素 R25001 invitrogen原装转染转化

 R25001Zeocin 博莱霉素 R25001 invitrogen原装转染转化

产品详细描述

Zeocin可选择Sh ble 基因表达的细胞。 与现在使用的其他动物细胞标记物无交叉抗性。因此这种抗生素可用来分离对其他筛选剂(如:庆大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin 是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素, 在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli )、真菌(如:酵母菌)、植物细胞、动物细胞。

 

Zeocin可选择Sh ble 基因表达的细胞。 与现在使用的其他动物细胞标记物无交叉抗性。因此这种抗生素可用来分离对其他筛选剂(如:庆大霉素,潮霉素)有抗性的克隆。Zeocin 是一种属于争光霉素家族的糖蛋白抗生素, 在体内能作用于大多数细菌(包括E. coli )、真菌(如:酵母菌)、植物细胞、动物细胞。

使用:    

  • 液体Zeocin 可用于细胞培养。
  • 用于筛选转化株的Zeocin 浓度根据PH 值和盐浓度改变。
  • PH 越高,盐浓度越低Zeocin 活性越大。
  • 普通大肠杆菌菌株筛选可在25 µg/ml zeocin 浓度的低盐LB 琼脂培养基中进行,PH 调至7.5 。
  • 动物细胞筛选:根据不同细胞系从100 到 750 µg/ml 。
  • 植物细胞筛选:根据不同的细胞种类和培养基从50 到 250 µg/ml 。
  • 酵母筛选:取决于种属和培养基,S. cerevisiae Sh ble 转化株在50 µg/ml 浓度的YPD 培养基中筛选,PH7.0.

举例:

构建融合Zeocin和GFP双筛选标记质粒pcB-Zeo-GFP。方法质粒LeCo-G/Zeo含有Zeo-GFP融合基因片段,通过PCR反应、BamHI酶切后连接替换空白质粒pCB的筛选基因gpt,通过菌落PCR,酶切图谱分析及测序分析鉴定重组质粒,构建成功后将其与野生型痘苗病毒进行位点特异性同源重组,经Zeocin药物筛选2代后,用流式细胞仪观察重组痘苗病毒GFP表达。结果经菌落PCR,1号、5号和10号菌落中扩增出426bp的目的条带,与预期的大小完全一致,经酶切分析和DNA测序进一步验证了重组质粒pCB-zeo-GFP;该质粒与野生型痘苗病毒同源重组,得到了重组的痘苗病毒;Zeocin筛选2代后,病毒上清感染细胞,流式细胞分析7.18%的细胞中有GFP的表达,而阴性对照仅有1.43%;Zeocin药物筛选5代后,通过激光共聚焦可在80%以上的细胞中观察带GFP;提取的重组痘苗基因组DNA也扩增出预期大小目的条带。结论含Zeocin和GFP双筛选标记的新型重组痘苗病毒不仅具有可观察性且具有药物抗性,非常容易进行筛选鉴定。

Zeocin™ Selection Reagent, (Liquid)

(Gibco®)

 

Description

Gibco® Zeocin™ selective reagent is a formulation of phleomycin D1, a glycopeptide antibiotic produced by Streptomyces verticillus. Gibco® Zeocin™ selective reagent acts by binding to and cleaving DNA, leading to cell death. Gibco® Zeocin™ selective reagent is used for selection of yeast, bacterial and mammalian cell cultures. This product is supplied at 100 mg/ml in sterile water and is used at a working concentration ranging between 50 – 400 µg/ml depending on the cell type. Life Technologies offers a variety of antibiotics and antimycotics for cell culture applications.

Product Use
For Research Use Only: Not intended for animal or human diagnostic or therapeutic use.

Specifications

General Specifications

Form: Liquid
Agent: Zeocin™
Product Size: 8 x 1.25 ml
Reagent Type: Antibiotic (Selective)
Concentration: 100 mg⁄ml
Validated Application: Eukaryotic Selection⁄Stable Cell Line Generation,

Bacterial Selection

Regulatory Statement: For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.

Contents and Storage

Storage conditions: -5 to -20°C
Shipping conditions: Ice
Shelf life: 24 months from date of manufacturezeocin,盐酸博莱霉素,博莱霉素,细胞培养,r25001,invitrogenzeocin,盐酸博莱霉素,博莱霉素,细胞培养,r25001,invitrogenzeocin,盐酸博莱霉素,博莱霉素,细胞培养,r25001,invitrogen

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