蛋白质技术
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核酸酶保护实验
简介 核糖核酸酶保护实验（Ribonuclease protection assay，RPA）是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针（32P或生物素）与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA；未结合的单链RNA经RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待测目的基因与特异RNA探针结合后形…
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细胞分泌蛋白质的含量测定实验
简介 分泌蛋白（secreted protein）是指在细胞内合成后，分泌到细胞外起作用的蛋白质，如消化酶、体液中的部分蛋白成分、抗体和部分激素等。因为分泌蛋白质常存在于成分复杂的体液中，如消化液、血液以及细胞培养的上清中，而且蛋白浓度常相对较低，所以需要使用灵敏度高、特异性好的方法进行分泌蛋白的含量测定。目前，用于细胞可溶性蛋白质的含量测定的方法主要有两种：免疫印迹法和酶联免疫吸附剂测定（enz…
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有氧氧化过程关键酶和重要产物测定
简介 在有氧条件下，葡萄糖氧化分解生成二氧化碳和水的过程称为有氧氧化（aerobic oxidation），是生物机体获取能量的主要方式。该过程分为 3 个阶段：第一阶段为糖酵解途径，葡萄糖转变成 2 分子丙酮酸，在细胞质中进行；第二阶段丙酮酸进入线粒体，经丙酮酸脱氢酶复合体催化，脱羧基转化成乙酰 CoA；第三阶段为柠檬酸循环和氧化磷酸化过程。柠檬酸循环的起始物乙酰 CoA，不仅是葡萄糖的氧化分解…
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氨基酸代谢产物分析
简介 氨基酸在体内一方面主要用以合成机体自身所特有的蛋白质、多肽及其他含氮物质；另一方面可通过脱氨作用、转氨作用、联合脱氨或脱羧作用，分解成α－酮酸、胺类及二氧化碳。氨基酸分解所生成的α－酮酸可以转变成糖、脂类或再合成某些非必需氨基酸，也可以经过柠檬酸循环氧化成二氧化碳和水，并释放能量。 目前用于氨基酸代谢产物分析的方法主要有 4 种：谷氨酰胺酶活性分析、丙氨酸转氨酶活性分析、谷氨酰胺含量测定和谷…
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活性氧自由基和清除体系活性分析
简介 活性氧自由基是机体氧化反应过程中产生的有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织和细胞。自由基通过氧化作用攻击生物大分子物质，导致 DNA、蛋白质、脂膜等结构损伤，与退行性疾病、心血管疾病、肿瘤发生等密切相关。细胞内源性的自由基清除系统，如谷胱甘肽、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶等，有助于清除体内的自由基，降低自由基对细胞的危害。 目前活性氧自由基和清除体系活性分析的实验方法有 2 种…
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酵母双杂交技术
简介 酵母双杂交系统(yeast two-hybrid)以酵母遗传分析为基础，研究反式作用因子之间相互作用对真核基因转录调控影响的实验系统。 其最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库，以获得新的蛋白质之间的相互作用，并分析研究新的基因。 本技术不仅可用于鉴定新的蛋白质相互作用，证实可疑的相互作用，确定相互作用的结构域，而且可直接获得编码相互作用的蛋白的基因。 原理 酵母双杂交（…
