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  • ELISA检测

    分子生物学技术 2022年8月3日

    1、总述   酶联免疫吸附测定法  1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,即酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成为分析化学领域中的前沿课题 ,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术( i…

  • Q-PCR

    分子生物学技术 2022年8月3日

    qPCR实验操作流程 Q-PCR实验流程: 一、 ①实验前准备,每天早上到实验室后,先把超净工作台的紫外灯打开15-20分钟。②超净台前做实验,需佩戴干净的橡胶手套/一次性薄膜手套,RNA 抽提需带口罩。③取EP管/枪头时需用镊子,不可以用使用过的手套直接取用。取完EP管/枪头后,袋子及时封好。④橡胶手套须放入超净台照射紫外,实验操 作过程中不得带出超净台,移液器在一天工作结束后调至最大…

  • Western Blot操作步骤

    分子生物学技术 2022年8月3日

    背景:  蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学George Stark。Neal Burnette于1981年所著的AnalyticalBiochemistry中首次被称为Western Blot。最开始做印迹的是一个叫Southern的科学家,但印迹的对象是DNA链,他把这种技术称为Southern blot,后来出现了两个过程相似,但是对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个对蛋白质,人们分别把这两…

  • MTT法细胞活性检测实验步骤

    分子生物学技术 2022年8月3日

    MTT检测法,是一种检测细胞存活和生长增殖的方法。检测原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO )能溶解细胞中的甲瓒,用酶标仪在490nm波长(或其他波长)处测定其光吸收值,在一定细胞数量范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,OD值越…

  • RT-PCR

    分子生物学技术 2022年8月3日

    反转录PCR(Reverse Transcription, RT-PCR)又称为逆转录PCR,是指扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA,然后再以cDNA为模板,用PCR方法加以扩增。 (一)逆转录酶的种类AMV:有较强的聚合酶活性和RNA酶H活性。最适42℃。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍,然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。MML…

  • 免疫印迹的基本原理、实验步骤

    分子生物学技术 2022年8月3日

     Western Blot原理        Western Blot(免疫印迹)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。转移后的…

  • 免疫印迹在实验的过程中常出现的问题

    分子生物学技术 2022年8月3日

    免疫印迹在实验过程中常出现的问题:         1. Western blot结果中的背景为什么较高?          可能的原因及建议         …

  • 引物设计中增加特异性的引物的特点

    分子生物学技术 2022年8月3日

        引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点:       ① 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列…

  • 实时荧光定量PCR技术基本原理

    分子生物学技术 2022年8月3日

       实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光染料,利用荧光信号来实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板浓度进行定量分析。       其特点有:       (1)用产生荧光信号的指示剂显示扩增产物的量,进行实时动态连续的荧光监测,避…

  • 免疫荧光染色服务

    分子生物学技术 2022年8月1日

    免疫荧光染色服务

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