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  • 通用 PCR

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 通用 PCR,英文名是 universal PCR,通用 PCR 作为一种基本的分子生物学技术,通过与其它新兴的基因分析技术结合。与经典 PCR 相比,通用 PCR 的应用把系统发育的序列比较分析范围扩展到了纲或门的分类水平上。而且此法对鉴定标本和划分生物类型在种群中的位置起重要作用。面对生物种类繁多、核酸序列千差万别,通用 PCR 技术的应用,不但最大限度地减轻了使用者不必要的工作量,也减…

  • PCR-变性梯度凝胶电泳

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 PCR-变性梯度凝胶电泳,是把 30~50 个 GC 碱基组成的核苷酸链加在其中一条引物的 5′ 端,通过 PCR 扩增目的基因,使扩增产物的一端含有 GC 碱基即 GC-clamp。由于 GC-clamp 为扩增片段中 Tm 值最高的区域,而其它部分因所含碱基的种类不同,其 Tm 值也不同,而且明显低于最高 Tm 值。将带有 GC-clamp 的 …

  • 限制性片段长度多态性PCR

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 限制性片段长度多态性 PCR,是理论依据是首先利用 PCR 扩增目的基因,然后用限制性内切酶酶解样品 DNA,产生大量的限制性酶切片断。将限制性酶切产物进行含有漠化乙锭的琼脂糖凝胶电泳分离,在紫外灯下即可分辨各种限制性片段的大小及其位置。或者将限制性酶切产物与探针杂交进行放射自显影,从而区分各种片段。由于目标 DNA 之间存在有同源性和变异性,当用同一种限制性内切酶酶解不同品种或同一品种的不…

  • 原位PCR技术

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 原位 PCR(in situ PCR)就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,在分子和细胞水平上检测特定的基因组序列、转基因及外源基因,对研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值,在分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域里具有巨大的应用前景。 根据操作方法的不同,原位PCR可分为间接法和直接法。直接法操作步骤较…

  • 定量PCR技术

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 定量PCR是指以一种标准作对照,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,对PCR起始模板量进行定量的技术。 根据原理的不同,目前主要采用的定量PCR方法包括极限稀释法、设立内参照物的定量PCR、荧光定量 PCR (fluorescence quantity PCR,FQ-PCR)等。 其中荧光定量PCR是最新发展起来的一项定量PCR技术。 原理 荧光定量PCR基本原理是在PCR反应体系中…

  • 甲基化特异PCR

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 甲基化特异PCR (methylation-specific PCR,MS-PCR) 是一种特异位点甲基化检测技术,是研究 DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一。目前用于甲基化特异PCR的方法主要有1种:甲基化特异PCR。 原理 甲基化特异PCR的基本原理是重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,用PCR扩增所需片段,则尿嘧啶全部转化成胸腺…

  • 不对称PCR实验

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 Gyllensten 等在 20 世纪 80 年代末发明了一种新的方法扩增单链的 DNA用于 DNA 的序列测定,这就是不对称 PCR (asymmetric polymerase chain reaction),它指的是利用不等量的一对引物来产生大量的单链 DNA (ssDNA) 的方法。 目前,用于不对称 PCR 实验的方法主要有 3 种:引物浓度不对称 PCR、常规热不对称 PCR 和…

  • PCR 测序实验

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 自从 Sanger 等 (1975) 引入双脱氧核昔三磷酸 (ddNTP) 作为链终止剂,DNA 序列测定技术得到迅速发展。目前,用于 PCR 测序的方法主要有 2 种:直接测序法和循环测序法。 原理 直接测序法的基本原理是 PCR 扩增获得双链 DNA 产物经变性形成单链,测序引物与其中一条模板链上的互补序列退火。退火的引物在低进行性反应条件下(如低温和低 dNTP 浓度),通过 DNA …

  • 乳化液PCR实验

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 2005 年,Margulies 等人在「Nature」上发表文章介绍了一种快速简单的测序方法:即以 DNA 扩增的乳胶系统 (emulsion system) 和皮升大小焦磷酸 (pyrophosphate) 为基础的测序方法——焦磷酸测序 (pyrosequencing) 方法。这种测序方法比传统的 Sanger 测序的方法快 100 倍, 假如利用这种方法来进行人类基因组的测序,那么在…

  • 基于 PCR 的大片段 DNA 的合成实验

    PCR技术 2022年8月3日

    简介 DNA 序列的化学合成为基因在异源系统中的高水平表达和功能研究提供了强有力的工具。近年来,已经发展了许多 DNA 序列的合成和收集的方法。 早期的方法主要是酶的连接和 FokI 方法,后来自身引发 PCR、PCR 集合和模板定向连接技术发展了起来,最近又报道了长 DNA 序列的合成和收集方法,其中典型方法有基于 PCR 热力学平衡的翻转方法 (thermodynamically balanc…

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