原位PCR技术

简介

原位 PCR（in situ PCR）就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，在分子和细胞水平上检测特定的基因组序列、转基因及外源基因，对研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值，在分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域里具有巨大的应用前景。

根据操作方法的不同，原位PCR可分为间接法和直接法。直接法操作步骤较少，但具有比较高的假阳性率；间接法步骤相对较多，需要的时间长，但结果可靠。

原理

根据操作方法的不同，原位PCR可分为间接法和直接法。

间接法基本原理是在固定组织、细胞标本并用蛋白酶消化处理后，先通过PCR扩增靶细胞内特定的核苷酸序列，再结合原位杂交进行核苷酸序列的检测及细胞内定位。

直接法基本原理是在进行原位PCR之前，将标记好的核苷酸或引物加入到PCR反应液中，随着扩增的进行，标记物直接掺入到PCR产物中，然后用放射自显影、免疫组织化学或荧光检测术对靶核酸分子进行细胞内定位及检测。

应用

原位 PCR常用于研究疾病的发病机理、临床过程及病理的转归、分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域等。

来源：丁香实验