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SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒  Qiagen 208054

SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒 Qiagen 208054

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QuantiNova SYBR Green PCR 试剂盒(SYBR qPCR 试剂盒)具有更高的特异性、灵敏度、速度和过程安全性,为基于 SYBR Green 的 qPCR 树立了新标准。一种新的热启动机制显着提高了实时 PCR 的特异性,优化的化学方法可在任何实时 PCR 循环仪上产生准确的 cDNA 或 gDNA 定量结果,甚至可以检测到单个目标拷贝。最后,内置视觉指示器确保正确移液。

使用 QuantiNova 探针 PCR 试剂盒(探针 qPCR 试剂盒)避免在较低温度下错误引发的有害影响。该试剂盒基于一种新的抗体介导的热启动机制,可提高基于探针的实时 PCR 的特异性和效率,从而在各种实时 PCR 循环仪上提供准确的单重或双重 cDNA 或 gDNA 分析。在室温下长达 100 小时的极端稳定性增加了便利性,无需任何冷却剂,使其成为处理高通量样品和自动化工作流程的理想选择。用于视觉识别正确移液的内置跟踪系统让您绝对放心,而即使是低目标量的极其灵敏的检测也可确保每次都获得可靠的 qPCR 结果。

QuantiNova 多重 PCR 试剂盒(多重 qPCR 试剂盒)可通过多重实时 PCR 或两步 RT-PCR 在单管中快速可靠地定量多达 5 个 cDNA 或 gDNA 靶标。Q-bond 技术和优化的预混液可在 1 小时内促进超快多重实时 PCR。独特的热启动和 PCR 缓冲系统在即用型 4x 预混液中的组合确保了在任何实时循环仪上的高度灵敏的 qPCR,无需优化,还提供了室温下的自动化反应设置选项。用于视觉识别正确移液的内置跟踪系统有助于防止人为错误,并且与用于 cDNA 合成的 QuantiNova Reverse Transcription Kit 组合允许包含 QuantiNova Internal Control RNA 以监测成功的逆转录和 qPCR。

 

用于准确反应设置的内置视觉指示器

QuantiNova PCR Kits 提供的预混液含有惰性蓝色染料,不会干扰实时 PCR,但会增加试管或孔中的可见度。QuantiNova 黄色模板稀释缓冲液含有惰性黄色染料。当模板核酸在 QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer 中稀释并添加到预混液中时,溶液的颜色会从蓝色变为绿色(见图“ 内置移液控制指示准确的反应设置”),提供每个反应设置正确的视觉指示。

QuantiNova SYBR Green PCR 试剂盒

QuantiNova SYBR Green PCR Kit 的高灵敏度可以准确、稳定地检测单个目标拷贝(参见图“ 对单拷贝目标进行稳健和灵敏的检测”)。即使在超快循环条件下也能实现这种极高的灵敏度。

QuantiNova SYBR Green PCR Kit 可用于多种模板量。该 SYBR 实时荧光定量 PCR 试剂盒的性能已经过 8 个数量级(从 100 ng 到 10 fg cDNA)的动态范围测试,无论使用何种仪器,定量都是准确而可靠的(见图“ 在宽动态范围内准确量化”)。

QuantiNova 化学试剂的严格特异性和卓越的灵敏度在 QIAGEN Rotor-Gene Q 上产生了最佳结果,但可用于任何实时 PCR 循环仪,无论格式、快速循环能力和是否需要被动参考染料。如果需要,只需将随 QuantiNova SYBR Green PCR Kit 提供的 ROX 添加到预混液中即可。使用 Rotor-Gene Q、Agilent Technologies Mx3005P、Applied Biosystems 7900 HT Fast、ViiA 7、StepOnePlus 和 7500 Fast、Roche LightCycler 480 和 Bio-Rad CFX96 的扩增和定量结果始终稳健且灵敏。
与其他 SYBR Green PCR 试剂盒相比,QuantiNova SYBR Green PCR 试剂盒可提供更好的结果。无论循环条件或仪器如何,QuantiNova 化学试剂都能明显产生更低的 CT 值、更高的重现性和更高的反应效率。

QuantiNova Yellow Template Dilute Buffer 可让您在反应设置过程中高枕无忧,但不需要使用 QuantiNova SYBR Green PCR Kit 获得出色的结果。QuantiNova 化学品设计灵活,因此可以整合到任何已建立的工作流程中。因此,对于您感兴趣的扩增目标以及您选择的仪器和稀释缓冲液,性能是最佳的。

QuantiNova Probe PCR 试剂盒

该探针实时 PCR 试剂盒的实时 PCR 混合物可在 30°C 下保存长达 100 小时,而不会影响后续反应的性能。即使在不使用任何冷却剂的情况下在室温下长时间储存​​后,其出色的稳定性也使 QuantiNova Probe PCR Kit 成为高通量反应设置和板叠处理的理想选择(参见表“储存对反应稳定性的影响”。

 

储存对反应稳定性的影响
平均 C T
QuantiNova Probe PCR 试剂盒 来自供应商 L 的探针 PCR 试剂盒
数量 ng 0小时 100 小时 0小时 100 小时
10 24.37 24.49 24.35 27.49
1 27.78 27.90 27.77 30.97
0.1 31.16 30.98 31.37 34.48
无模板控制 没有检测到 没有检测到 没有检测到 没有检测到

在 30°C 下储存 100 小时前后的 C T值比较。包括主混合物、模板 cDNA、引物和 TNF 探针在内的实时 PCR 在 30°C 下孵育 100 小时,并与新制备的反应一起在实时 PCR 中运行。测试了 3 种不同模板量的三次反应。与供应商 L 的探针 PCR 试剂盒相比,QuantiNova 探针 PCR 试剂盒提供的 CT 值在样品在 30°C 下长时间储存​​后没有变化。

QuantiNova Probe PCR Kit 的高灵敏度可以准确、稳定地检测单个目标拷贝(参见图“ 对单个目标副本进行灵敏且稳健的检测”)。这些试剂盒随附的特殊预混液可准确定量单管中丰度差异很大的 2 个靶标。这节省了时间、金钱,并减少了所需的样品材料量。此外,获得的双重 PCR 数据与从单重 PCR 获得的数据相当。
QIAGEN 专有且久经考验的缓冲液技术与新的 QuantiNova DNA 聚合酶、QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard 的独特组合,确保实时 PCR 在第一次尝试时就成功,无需昂贵和耗时的优化,甚至具有挑战性的实时 PCR 检测(见图“ 具有挑战性的检测结果出众”)。

QuantiNova Probe PCR Kit 可用于任何实时循环仪。ROX 在单独的试管中提供,如果使用使用 ROX 作为被动参比染料的循环仪,可以添加。该试剂盒在灵敏度、重现性和效率方面在不同循环仪之间提供高度一致的结果。尽管导致不同循环方案的不同循环仪的快速循环能力不同,但结果的一致性得以保持。

QuantiNova 多重 PCR 试剂盒

QuantiNova Multiplex PCR Kits 提供的特殊预混液允许快速设置多重反应并在第一次尝试时提供成功的结果,提供与单重 PCR 数据相当的多重 PCR 数据。高度浓缩的 4x 预混液可容纳高达 800 ng 的模板输入,即使在多达 5 重反应中也能确保出色的灵敏度。该试剂盒可以清楚地区分模板量的微小差异,并对丰度差异很大的靶标进行准确定量。

一种新颖的、抗体介导的热启动机制确保了出色的特异性,并允许在室温下进行反应设置,非常适合自动化程序。专门开发的快速 PCR 缓冲液包含添加剂 Q-Bond,可显着减少退火和延伸时间,允许在不到一小时的时间内进行多重 qPCR。视觉移液控制有助于防止人为错误并提高过程安全性,特别是如果与 QuantiNova Reverse Transcription Kit 中提供的内部控制 RNA 结合用于定量 2 步 RT-PCR。

QuantiNova Multiplex PCR Kit 通过使用超快和过程中控制的多重 qPCR 从有限的样品材料中产生更多洞察力,从而提高工作流程效率。

原则

QuantiNova PCR Kits 提供了具有最高特异性的 cDNA 或 gDNA 分析,因为它采用了一种新的抗体介导的热启动机制(参见图“ 新型QuantiNova 热启动机制的原理”)。在低温下,QuantiNova DNA 聚合酶通过 QuantiNova Antibody 和新型添加剂 QuantiNova Guard 保持在非活性状态,从而稳定复合物。这提高了热启动的严格性并防止非特异性退火引物和引物二聚体的延伸。在将温度升高到 95°C 的 2 分钟内,QuantiNova Antibody 和 QuantiNova Guard 变性,并且 QuantiNova DNA 聚合酶被激活,从而实现扩增。

此外,QuantiNova 化学试剂包括简化您的工作流程而不会损失 PCR 灵敏度和效率的功能。预混液和 QuantiNova Yellow Dilution Buffer 中的惰性染料可作为每个反应已正确设置的视觉指示剂。预混液的蓝色增加了反应容器中内容物的可见度,并在添加在 QuantiNova Yellow Dilution Buffer 中稀释的模板核酸后变为绿色(参见“Accurate reaction setup shown by the built-in pipetting control”)。QuantiNova SYBR PCR Kits 中包含的 PCR 缓冲液的独特配方增强了热启动机制的严格性并缩短了循环步骤,因此您的 PCR 完成得更快并可以提高您的通量。

QuantiNova Multiplex PCR Kits 在标准和快速循环仪上都可以在宽动态范围内提供高度灵敏和快速的结果,无需优化。专门开发的快速 PCR 缓冲液含有 Q-Bond 添加剂,可显着缩短退火和延伸时间(参见”Fast prime annealing”)。

在同一反应中而不是在单独的反应中扩增参考基因和靶基因,通过最大限度地减少处理错误来提高基因定量的可靠性。此外,QuantiNova Reverse Transcription Kit 中提供的用于定量 2 步 RT-PCR 的内部对照 RNA 可用于监测成功的逆转录和 qPCR。

QuantiNova Multiplex PCR Buffer 包含平衡的 K+ 和 NH4+ 离子组合以及独特的合成因子 MP,它们共同促进引物和探针与核酸模板稳定高效地退火,从而实现高 PCR 效率(见图“ 独特的多重 PCR 缓冲液促进了稳定和高效的退火”)
。QuantiNova Multiplex PCR Kit master mix 可以方便地在 2–8°C 下保存长达 12 个月,而且反应设置在室温下非常稳定,允许自动化提高效率和准确性的程序。

程序

QuantiNova PCR Kits 包含即用型预混液,无需优化反应和循环条件。只需将模板 gDNA 或 cDNA 和引物(基于 SYBR Green 的检测)或模板 gDNA 或 cDNA、引物和探针(基于探针的检测)添加到预混液中,然后按照手册中的方案,即可在任何真实环境中获得快速可靠的结果-时间循环仪。ROX 被动参比染料在单独的试管中提供,染料浓度可根据所用循环仪的类型进行调整。因此,QuantiNova PCR Kits 几乎可用于任何实时循环仪,无论格式或循环条件如何。由于优化的 ROX 浓度,即使是低拷贝数的检测也可以通过自动数据分析实现。

QuantiNova Multiplex PCR Kits 包含即用型 4x 预混液,无需优化反应和循环条件。只需将多达 800 ng 模板 DNA 和引物-探针组添加到预混液中,然后按照手册中的方案,即可在任何实时循环仪上获得快速可靠的结果。套件在单独的试管中提供 ROX 被动参比染料,以根据您的仪器需要调整适当的 ROX 浓度。

为了在实时两步法 RT-PCR 中获得最佳结果,我们建议使用 QuantiNova Reverse Transcription Kit 合成 cDNA,该试剂盒可在 20 分钟内快速合成 cDNA,同时去除基因组 DNA 污染。它还提供 QuantiNova 内部对照 RNA,对成功的逆转录和 qPCR 进行过程监控。

应用

QuantiNova SYBR Green PCR Kit 可用于基于 SYBR Green 的 cDNA 靶基因表达分析和任何实时循环仪上的定量 gDNA 分析。这包括来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、LIFE Technologies、Roche 和 Agilent 的仪器,以及 Rotor-Gene Q。

QuantiNova Probe PCR Kits 可用于基于探针的 cDNA 目标基因表达分析和任何实时循环仪上的定量 gDNA 分析。这包括来自 Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche 和 Agilent 的仪器。

QuantiNova Multiplex PCR Kits 可用于在任何实时循环仪上对 cDNA 或 gDNA 靶标进行多重基因表达分析。为了充分发挥多重优势的能力,我们推荐提供高达 5 重容量的仪器,例如 Rotor-Gene Q。

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