细胞融合实验

简介

细胞融合（cell fusion）是指在自然条件下或用人工诱导的方法将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的过程，包括质膜的连接与融合、胞质合并，细胞核、细胞器和酶等互成混合体系。细胞融合可分为同种细胞的融合和异种细胞的融合。其中异种细胞的融合也称体细胞杂交（somatic hybridization），是指在离体条件下用人工方法把不同种的细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的技术。

细胞融合的方法有生物法、化学法和物理法。生物法常指病毒诱导法（如仙台病毒），主要以病毒为媒介，使单个细胞间发生凝聚，并在病毒酶作用下产生融合细胞。化学法常用的是化学诱导剂聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）结合高 pH、高钙离子法。该法操作方便，目前已成为人工诱导细胞融合的主要手段。物理法有显微操作、电融合法等，操作也较简便，但需要专用的设备。其中电融合法具有可控、高效、无毒等优点，目前已有较多应用。

原理

PEG 介导的细胞融合的基本原理是利用 PEG 使细胞相互接触部位的膜结构发生重排，加之膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻质膜在修复时相互合并在一起，导致细胞之间发生融合。PEG 介导的细胞融合率受下述因素影响。

①PEG 的分子量与浓度：分子量及其浓度与融合率成正比；但分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。为了兼顾二者，常用的 PEG 相对分子质量为 1000～4000，浓度为 40％～60％。

②PEG 的 pH 值：pH 值在 8.0～8.2 之间融合效率最高。

③融合时的温度：由于生物膜的流动性与温度成正比，在细胞可承受的温度范围内适当提高温度，可提高融合率。

④处理时间：处理时间越长，融合率越高，但对细胞的毒害也越大。故一般将处理时间限制在 1.0～1.5 min 之内。若融合后不继续培养，可将处理时间延长至 20 min。

应用

细胞融合不仅可用于核质关系、基因定位、体细胞的遗传和发育等生物学的基础理论研究，而且在生产实践上还有重要的应用价值，目前已成功应用于单克隆抗体的制备、新品种的培养、性状的改良、疾病的治疗和潜伏病毒的研究等领域。

来源：丁香实验