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Transwell 细胞迁移

细胞迁移是指细胞在接收到内源或外源迁移信号后而产生的移动。细胞迁移是通过胞体形变进行的缓慢的定向移动,涉及细胞觅食、伤口痊愈、胚胎发生、免疫反应、感染和癌症转移等生理现象。因此通过对细胞迁移的研究,对阻止癌症转移、异体植皮等医学应用方面具有一定意义。

细胞侵袭实验则是研究肿瘤细胞对基质膜消化后的迁移运动,肿瘤细胞须经血管基底膜穿入深面间质后才能侵袭组织和转移至远处。

Transwell 细胞迁移

肿瘤细胞侵袭迁移能力的改变通常采用Transwell小室进行检测。Transwell小室是一种膜滤器,也认为是一种有通透性的支架(Permeable Supports)。这层膜带有微孔,孔径大小0.1-12.0μm,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜。

将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可用影像到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

技术应用

应用包括细胞迁移、趋化(趋化因子对细胞的定向诱导),侵袭(癌细胞侵袭上指肿瘤细胞向局部侵犯或远处转移),共培养(同一培养体系里,两种细胞非接触性培养)。细胞迁移侵袭上涉及多个步骤、高度完整的过程,在癌症转移、动脉粥样硬化和关节炎等疾病恶化中起重要作用。

孔板选择

根据 transwell 板的不同,transwell 小室可以分为 6 孔板小室、12 孔板小室和 24 孔板小室以及和 transwell 皿配套的 75 mm 直径的小室;根据孔径的不同,从小孔径到大孔径又分为 0.4μm 规格、3μm 规格、5μm 规格、8μm 规格,不同实验对小室孔径的要求也不一样。

小于 3μm 孔径的小室,细胞不会迁移通过,研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,应该选择 3μm 以下的孔径。例如共培养实验和 caco-2 细胞转运模型实验。

共培养实验

常用 0.4、34μm,将细胞 A 种于上室,细胞 B 种于下室,可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的影响。

细胞迁移的实验

要用 5.0、8.0、12.0μm 的小室,这样上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室,计数进入下室的细胞量可反映细胞的趋化能力、迁移能力和侵袭能力。

趋化性实验

细胞 B 对细胞 A 的趋化作用,将细胞 A 种于上室,细胞 B 种于下室,可以研究细胞 B 分泌或代谢产生的物质对细胞 A 的趋化作用;趋化因子对细胞的趋化作用,将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。

细胞迁移实验

常用 8.0、12.0μm 膜,上室种细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映细胞的迁移能力。

细胞侵袭实验

常用 8.0、12.0μm 膜,原理与细胞迁移实验类似。上室种细胞,下室加入 FBS 或某些特定的趋化因子,细胞会向营养成分高的下室跑,但与细胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映细胞的侵袭能力。

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